ÿþ<!DOCTYPE HTML PUBLIC "-//W3C//DTD HTML 4.01 Transitional//EN" "http://www.w3c.org/TR/1999/REC-html401-19991224/loose.dtd"> <HTML lang=cs xml:lang="cs" xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml"><HEAD><TITLE>Lékopis - Cirkulární dichroismus</TITLE> <META http-equiv=Content-Type content="text/html; charset=windows-1250"><LINK href="styl.css" type=text/css rel=stylesheet> <META content="MSHTML 6.00.2800.1126" name=GENERATOR></HEAD> <BODY background=undefined> <DIV class=info> eský lékopis 1997</DIV> <P class=Lnadpis>2.2.41 Cirkulární dichroismus</P> <P class=Linf>1998</P> <P>Jako cirkulární dichroismus se ozna uje rozdíl absorbancí levoto iv a pravoto iv cirkulárn polarizovaného svtla u opticky aktivní látky v oblasti jejího absorp ního pásu.</P> <P>PYímé mYení poskytuje stYední algebraickou hodnotu:</P> <P align=center><I>&#916;A =A<SUB>L</SUB>-A<SUB>R</SUB></I></P> <P><EM><FONT face=Tahoma>&#916;</FONT>A</EM> - diferen ní cirkulárn dichroická absorbance, </P> <P>A<SUB>L</SUB> - absorbance levoto iv cirkulárn polarizovaného svtla, </P> <P>A<SUB>R </SUB>- absorbance pravoto iv cirkulárn polarizovaného svtla. </P> <P>Cirkulární dichroismus se vypo ítá podle rovnice:</P> <TABLE align=center> <TBODY> <TR> <TD vAlign=center rowSpan=2><I>&#916;&#949;&nbsp;=&nbsp;&#949;<SUB>L</SUB>&nbsp;-&nbsp;&#949;<SUB>R</SUB>&nbsp;=&nbsp;</I></TD> <TD class=vzorec><I>&#916;A</I></TD></TR> <TR> <TD><I>c*l</I></TD></TR></TBODY></TABLE> <P><I>&#916;&#949;</I> - molární cirkulární dichroismus nebo molární diferen ní dichroická absorptivita vyjádYená v litr.mol<SUP>-1</SUP>.cm<SUP>-1</SUP></P> <P><I>&#949;<SUB>L</SUB></I> - molární absorptivita <I>(2.2.25)</I> levoto iv cirkulárn polarizovaného svtla, </P> <P><I>&#949;<SUB>R</SUB></I> - molární absotptivita pravoto iv cirkulárn polarizovaného svtla, </P> <P><I>c</I> - koncentrace zkouaeného roztoku v mol*l<SUP>-1</SUP>, </P> <P><I>t</I> - tlouaeka vrstvy v cm.</P> <P>K charakterizaci cirkulárního dichroismu se mohou pou~ívat také následující veli iny:<BR><I>Faktor dissymetrie:</I></P> <TABLE align=center> <TBODY> <TR> <TD vAlign=center rowSpan=2><I>g&nbsp;=&nbsp;</I></TD> <TD class=vzorec><I>&#916;&#949;</I></TD></TR> <TR> <TD><I>&#949;</I></TD></TR></TBODY></TABLE> <P><I>&#949;</I> - molární absotptivita <I>(2.2.25)</I>.</P> <P><I>Molární elipticita:</I></P> <P>Nkteré typy pYístrojo mYí pYímo hodnotu elipticity &#952;, vyjádYenou ve stupních. PYi pou~ití tchto pYístrojo mo~e být molátní elipticita vypo ítána pomocí následující rovnice:</P> <TABLE align=center> <TBODY> <TR> <TD vAlign=center rowSpan=2>[&#952;]&nbsp;=&nbsp;</TD> <TD class=vzorec>&#952;*M</TD></TR> <TR> <TD>c*1*10</TD></TR></TBODY></TABLE> <P>[&#952;] - molární elipticita vyjádYená ve stupních.cm<SUP>2</SUP>.decimol<SUP>-1</SUP>, </P> <P>&#952; - hodnota elipticity ode tená na pYístroji, </P> <P>M - relativní molekulová hmotnost zkouaené látky, </P> <P>c - koncentrace zkouaeného roztoku v g.m.ml<SUP>-1</SUP></P> <P>l - tlouaeka vrstvy v centimetrech.</P> <P>Vzájemný vztah mezi molámí elipticitou a molámím cirkulárním dichroismem udává následující rovnice:</P> <TABLE align=center> <TBODY> <TR> <TD vAlign=center rowSpan=2>[&#952;]&nbsp;=&nbsp;2, 303&#916;&#949;</TD> <TD class=vzorec>4500</TD> <TD vAlign=center rowSpan=2>&nbsp;&#8776;&nbsp;3300&#916;&#949;</TD></TR> <TR> <TD align=middle>&#960;</TD></TR></TBODY></TABLE> <P>Molární elipticita se asto pou~ívá pYi analýze bílkovin a nukleových kyselin. V tomto pYípad se molární koncentrace vyjadYuje jako monomerní zbytek vypo ítaný pomocí výrazu:</P> <TABLE align=center> <TBODY> <TR> <TD class=vzorec>molekulová hmotnost</TD></TR> <TR> <TD>po et aminokyselin</TD></TR></TBODY></TABLE> <P>StYední relativní molekulová hmotnost monomerního zbytku je 100 a~ 120 (obvykle 115) pro bílkoviny a asi 330 pro nukleové kyseliny (ve form sodných solí).</P> <P><I>ZaYízení.</I> Zdrojem svtla (S) je xenonová lampa; svtlo prochází dvojitým monochromátorem (M) s kYemennými hranoly (P<SUB>1</SUB>, P<SUB>2</SUB>).</P> <P>Lineární svtelný paprsek z prvního monochromátoru je atpen na dv slo~ky, které jsou v druhém monochromátoru polarizovány v pravých úhlech. Výstupní atrbina v monochromátoru eliminuje mimoYádný paprsek.</P> <P>Získané polarizované monochromatické svtlo prochází opticky aktivním modulátorem (Cr); výsledkem je stYídavé cirkulárn polarizované svtlo.</P> <P>Paprsek pak prochází zkoumaným vzorkem (C) a dopadá na fotonásobi  (PM) spojený se zesilova em, který produkuje dva elektrické signály: jedním je stejnosmrný proud V<sub>c</sub> a druhým stYídavý proud s modula ní frekvencí V<sub>ac</sub> charakteristickou pro zkouaený vzorek. Fáze udává znaménko cirkulámího dichroismu. Pomr V<sub>ac</sub> / V<sub>c</sub> je úmrný diferen ní absorpci ”A, která vytvoYila signál. Dichrograf b~n pracuje v oblasti vlnových délek 170 nm a~ 800 nm.</P> <P><i>Kalibrace pYístroje.</i></P> <P><i>PYesnost stupnice absorbance.</i> 10, 0 mg <i>isoandrosteronu R</i> se rozpustí v <i>dioxanu R</i> a zYedí se stejným rozpouatdlem na 10, 0 ml. Spektrum cirkulárního dichroismu roztoku se zaznamená v rozmezí vlnových délek 280 nm a~ 360 nm. V maximu pH 304 nm hodnota ”&epsilon; je +3, 3. Pro toto mYení mo~e být pou~it také roztok (hS)-(+)-10-<i>kafrsulfonové kyseliny R.</i></P> <P><i>Linearita modulace.</i> 10, 0 mg (IS)-(+)-10-<i>kafrsulfonové kyseliny R</i> se rozpustí ve <i>vod R</i> a zYedí se stejným rozpouatdlem na I0, 0 ml. PYesná koncentrace kafrsulfonové kyseliny v roztoku se ur í ultrafialovou spektrofotometrií <i>(2.2.25)</i> s pou~itím hodnoty specifické absorbance 1, 49 pYi 285 nm.</P> <P>Spektrum cirkulárního dichroismu se zaznamená mezi 185 nm a 340 nm. V maximu pYi 290, 5 je hodnota ”&epsilon; +2, 2 a~ +2, 5. V maximu pYi 192, 5 nm je zmYená hodnota ”&epsilon; -4, 3 a~ -5.</P> <P>Pro kalibraci mo~e být také pou~it (IS)-(+) nebo antipod (IR)-(-)-<i>amonium-l0-kafrsulfonat R</i>.</P> <P>Obr. 2.2.41-1 Optické schéma dichrografu</P></I></I></BODY></HTML>