Lékopis - Kyselina octová v syntetických peptidech

Český lékopis 1997

2.5.34 Kyselina octová v syntetických peptidech

2001

Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).
Zkoušený roztok. Připraví se způsobem popsaným v článku.
Porovnávací roztok. Připraví se roztok kyseliny octové ledové r (0,10 g/l) ve směsi objemových dílů mobilní fáze B a mobilní fáze A (5 + 95).

Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro hromatografii R (5 μm),
mobilní fáze s průtokovou rychlostí 1,2 ml/min:
mobilní fáze A - 0,7 ml kyseliny fosforečné R se zředí vodou R na 1000 ml; pH se upraví hydroxidem sodným koncentrovaným RS na hodnotu 3,0,
mobilní fáze B - methanol R2,

Čas (min)	Mobilní fáze A % (V/V)	Mobilní fáze B % (V/V)
0-5 5-10 10-20 20-22 22-30	95 95 → 50 50 50 → 95 95	5 5 → 50 50 50 → 5 5

spektrofotometrického detektoru, 210 nm.

Nastříkne se 10 μl porovnávacího roztoku a 10 μl zkoušeného r oztoku. Na získaných chromatogramech je retenční čas kyseliny octové 3 min až 4 min. Základní linie představuje strmý vzestup po začátku lineárního gradientu, který odpovídá eluci peptidu z kolony. Stanoví se obsah kyseliny octové v peptidu.