Lékopis - 5.1.2 Třídávková zkouška s latinskými čtverci

Český lékopis 1997

5.1.2 Třídávková zkouška s latinskými čtverci

Stanovení účinnosti antibiotik difuzní metodou v pravoúhlých plotnách

Použity standard má předpokládanou účinnost 4855 m.j./mg, zkoušený přípravek má stanovenou účinnost 5600 m.j./mg. Jako základní ředění bylo rozpuštěno 25,2 mg standardu v 24,5 ml rozpouštědla a 21,4 mg zkoušeného přípravku v 23,95 ml rozpouštědla. Tento základní roztok byl u obou přípravků ředěn 1 : 20 a dále byl použit ředicí poměr 1,5.

Latinské čtverce byly vytvořeny metodou popsanou v části 8.6, viz. tabulka 5.1.2-I. Odpovědi (inhibiční zóny jsou v mm x 10) jsou uvedeny v tabulce 5.1.2-II. Průměry pro jednotlivá ošetření jsou v tabulce 5.1.2-III. Graficky jsou data zobrazena na obrázku 5.1.2-I, který nezadává důvod pochybovat o splnění požadavků normality a homogenity rozptylů.

Tab. 5.1.2-I Rozložení ošetření na plotně

	1	2	3	4	5	6
1	S₁	T₁	T₂	S₃	S₂	T₃
2	T₁	T₃	S₁	S₂	T₂	S₃
3	T₂	S₃	S₂	S₁	T₃	T₁
4	S₃	S₂	T₃	T₁	S₁	T₂
5	S₂	T₂	S₃	T₃	T₁	S₁
6	T₃	S₁	T₁	T₂	S₃	S₂

Tab.5.1.2-II Změřené inhibiční zóny v mm x 10

	1	2	3	4	5	6	průměry řádků
1	161	160	178	187	171	194	175,2 = R₁
2	151	192	150	172	170	192	171,2 = R₂
3	162	195	174	161	193	151	172,7 = R₃
4	194	184	199	160	163	171	178,5 = R₄
5	176	181	201	202	154	151	177,5 = R₅
6	193	166	161	186	198	182	181,0 = R₆
průměry sloupců	172,8´ = C₁	179,7 = C₂	177,2 = C₃	178,0 = C₄	174,8 = C₅	173,5 = C₆

Tab. 5.1.2-III Průměry

	Standard S			Přípravek T
	S₁	S₂	S₃	T₁	T₂	T₃
průměr	158,67	176,50	194,50	156,17	174,67	195,50

Obr. 5.1.2-I

Dosazením do vzorců v tabulkách 3.2.3-I a 3.2.3-II se získá:

P_S = 529,667

L_S = 35,833

P_T = 526,333

L_T = 39,333

H_P =	6	= 2
	3

H_L =	72	= 3
	24

Pomocí vzorců z tabulek 3.2.3-III a 3.2.3-IV se dokončí výpočet analýzy rozptylu. Výsledky jsou v tabulce 5.2.1-IV.

Tab. 5.1.2-IV

Zdroj variability	Stupně volnosti	Součet čtverců	Průměrný čtverec	F-statistika	Pravděpodobnost
přípravek regrese nerovnoběžnost nelinearita	1 1 1 2	11,1111 8475,0417 18,3750 5,4722	11,1111 8475,0417 18,3750 2,7361	408,1 0,885 0,132	0,000 0,358 0,877
ošetření řádky sloupce reziduální chyba	5 5 5 20	8510 412 218,6667 415,3333	82,40 43,73 20,7667	3,968 2,106	0,012 0,107
celkem	35	9556

Výsledky této analýzy ukazují, že jsou statisticky významné rozdíly mezi jednotlivými řádky. To poukazuje na zpřesnění výsledků zkoušky při použití latinských čtverců oproti úplnému znáhodnění plánu zkoušky. Vysoká významnost závislosti na dávce a nevýznamnost odchylky od předpokladu linearity a rovnoběžnosti potvrzují, že je možné pro zkoušku vypočítat účinnost.

Dosazením do vzorců části 3.2.5 se získá:

společný sklon

b =	3 x (35,833 + 39,333)	= 46,346 ,
	ln(1,5) x 6 x 2

logaritmus relativní účinnosti

M'_T =	526,333 - 529,667	= -0,023974 ,
	3 x 46,346

C =	8475,0417	= 1,0108 ,
	8475,0417 - 20,7667 x 2,086²

V =	8475,0417	= 0,2192
	46,346²x 3 x 6

a logaritmus mezí spolehlivosti je:

1,0108 x (-0,0240) ± √0,0108 x (1,0108x(-0,0240)² + 2 x 0,2192) = -0,02423 ± 0,06878 .

Odlogaritmováním se získá relativní účinnost 0,9763 s 95% mezemi spolehlivosti od 0,9112 do 1,0456.

Je nutno použít korekční faktor

4855 x 25,2/24,5		= 0,99799 ,
5600 x 21,4/23,95		= 0,99799 ,

protože ředění nejsou z pohledu předpokládané účinnos nosti zcela ekvivalentní. Vynásobením korekčním faktorem a předpokládanou účinností 5600 m.j./mg se získá účinnost zkoušeného přípravku 5456 m.j./mg s 95% intervalem spolehlivosti od 5092 do 5843 m.j./mg.