5.1.3 Čtyřdávková zkouška s náhodnými bloky
Stanovení účinnosti antibiotik turbidimetrickou metodou
Tato zkouška je navržena pro zjištění účinnosti v mezinárodních jednotkách na lahvičku. Standard má stanovenou účinnost m.j./mg. Zkoušený přípravek má předpokládanou účinnost 20 000 mj./lahvičku. Na základě těchto informací bylo následujícím způsobem připraveno základní ředění. 16,7 mg standardu bylo rozpuštěno v 25 ml rozpouštědla a obsah jedné lahvičky zkoušeného přípravku ve 40 ml rozpouštědla. Konečné ředění bylo připraveno nejprve zředěním 1 : 40 a dále použitím ředicího faktoru 1,5. Zkumavky byly umístěny do vodní lázně v uspořádání do náhodných bloků, viz část 8.5. Odpovědi (absorbance) jsou uvedeny v tabulce 5.1.3-I.
Pohled na obrázek 5.1.3-I nedává důvod pochybovat o platnosti předpokladů normality a homogenity rozptylů zobrazených dat. Směrodatná odchylka S3 je poněkud vyšší, ale není důvod ke zvýšení pozornosti.
Tab. 5.1.3-I Absorbance suspenze (x 1000)
|
Standard S |
Přípravek T |
||||||||
| blok |
S1 |
S2 |
S3 |
S4 |
T1 |
T2 |
T3 |
T4 |
Průměr |
|
1 2 3 4 5 |
252 249 247 250 235 |
207 201 193 207 207 |
168 187 162 155 140 |
113 107 111 108 98 |
242 236 246 231 232 |
206 197 197 191 186 |
146 153 148 159 146 |
115 102 104 106 95 |
181,1 179,0 176,0 175,9 167,4 |
| průměr |
246,6 |
203,0 |
162,4 |
107,4 |
237,4 |
195,4 |
150,4 |
104,4 |
|
Obr. 5.1.3-I
Použitím vzorců z tabulky 3.2.3-I a 3.2.3-II se získá:
| PS = 719,4 | LS = -229,1 | ||||||||
| PT = 687,6 | LT = -222 | ||||||||
|
|
Analýza rozptylu je vypočtena pomocí vzorců z tabulek 3.2.3-III a 3.2.3-IV. Výsledky jsou v tabulce 5.1.3-II.
Tab. 5.1.3-II Analýza rozptylu
|
Zdroj variability |
Stupně volnosti |
Součet čtverců |
Průměrný čtverec |
F-statistika |
Pravděpodobnost |
|
přípravek regrese nerovnoběžnost nelinearita |
1 1 1 4 |
623,025 101 745,6 25,205 259,14 |
623,025 101 745,6 25,205 64,785 |
1887,1 0,467 1,202 |
0,000 0,500 0,332 |
|
ošetření bloky reziduální chyba |
7 4 28 |
102 662 876,75 1509,65 |
219,188 53,916 |
4,065
|
0,010
|
| celkem |
39 |
105 048,4 |
Rozdíl mezi bloky je statisticky významný a to indikuje, že použití náhodných bloků pro plán zkoušky zvýšilo přesnost prováděné zkoušky. Vysoká významnost závislosti na dávce a nevýznamnost odchylky od předpokladu linearity a rovnoběžnosti potvrzují, že je možno pro zkoušku vypočíst účinnost.
Dosazením do vzorců části 3.2.5 se získá:
společný sklon
| b = | 1x (-229,1 - 222) | = -111,255 |
|
ln(1,5) x 5 x 2 |
logaritmus účinnosti
| M'T = | 687,6 - 719,4 | = 0,071457 |
|
4 x (-111,255) |
| C = |
101 745,6 |
= 1,00223 |
|
101 745,6 - 53,916 x 2,0482 |
| V = |
101 745,6 |
= 0,4110 |
|
(-111,255)2 x 4 x 5 |
a logaritmus mezí spolehlivosti je:
1,00223 x 0,0715 ± √0,00223 x (1,00223 x 0,07152 + 2 x 0,4110) = 0,07162 ± 0,04293.
Odlogaritmováním se získá relativní účinnost 1,0741 s 95% mezemi spolehlivosti od 1,0291 do 1,1214.
Je nutno použít korekční faktor
| 670 x 16,7/25 | = 0,89512 , |
| 20 000 x 1/40 |