5.2.2 Úplně znáhodněný plán (0, 4, 4, 4)
Zkouška in vitro chřipkové vakcíny
U dvou chřipkových vakcín je zjišťován obsah haemaglutininového antigenu (HA) pomocí jednoduché radiální imunodifuse. Oba přípravky mají deklarovanou účinnost 15 µg HA na dávku, což je ekvivalentní 30 µg HA/ml. Standard má referenční účinnost 39 µg HA/ml.
Standard a zkoušený přípravek byly připraveny ve čtyřech koncentracích po dvou opakováních připravených na základě referenční a deklarované účinnosti. Po ustálení reakcí byla změřena zóna prstence sraženiny. Výsledky jsou zobrazeny v tabulce 5.2.2-I.
Tabulka 5.2.2-I Zóny srážení (mm2)
|
Koncentrace (μg/ml) |
Standard S |
Přípravek T |
Přípravek U | |||
|
I |
II |
I |
II |
I |
II | |
|
7,5 15,0 22,5 30,0 |
18,0 22,8 30,4 35,7 |
18,0 24,5 30,4 36,6 |
15,1 23,1 28,9 34,4 |
16,8 24,2 27,4 37,8 |
15,4 20,2 24,2 27,4 |
15,7 18,6 23,1 27,0 |
Obr. 5.2.2-I
Grafické zobrazení výsledků nenaznačuje žádnou neobvyklost. Výsledky vzorců z tabulek 3.3.3-I a 3.3.3-II dávají tyto výsledky:
| PS = 108,2 | PT = 103,85 | PU = 85,8 |
| LS = 301,1 | LT = 292,1 | LU = 234,1 |
| aS = 141,0 | aT = 116,7 | aU = 139,8 |
| bS = 61,2 | bT = 64,95 | bU = 39,2 |
| GS = 3114,3 | GT = 2909,4 | GU = 1917,3 |
| JT = 2,227 | JU = 0,083 |
a
| HI = 0,0093 | a' = 11,04 | K = 14 785,8 |
a dále se vypočte analýza rozptylu, viz tabulka 5.2.2-II, za použití vzorců z tabulek 3.3.3.1-III a 3.3.3.1-IV.
Tabulka 5.2.2.-II Analýza rozptylu
|
Zdroj variability |
Stupně volnosti |
Součet čtverců |
Průměrný čtverec |
F-statistika |
Pravděpodobnost |
|
regrese průsečík nelinearita |
3 2 6 |
1087,7 3,474 5,066 |
362,6 1,737 0,844 |
339,5 1,626 0,791 |
0,000 0,237 0,594 |
|
ošetření reziduální chyba |
11 12 |
1096,2 12,815 |
1,068 |
|
|
| celkem |
23 |
1109,0 |
Byla tedy prokázána statisticky velmi významná závislost odpovědi na dávce, na rozdíl od statisticky nevýznamné odchylky od předpokladu linearity a společného průsečíku. Může být tedy vypočten odhad účinnosti
| Sklon standardu je b'S = | 6x301,1 - 60x11,04 | = 6,356. |
|
180 |
| Sklon přípravku T je b'T = | 6x292,1 - 60x11,04 | = 6,056. |
|
180 |
| Sklon přípravku U je b'U = | 6x234,1 - 60x11,04 | = 4,123. |
|
180 |
| To vede k odhadu relativní účinnosti | 6,056 | = 0,953 pro vakcínu T a | 4,123 | = 0,649 pro vakcínu U. |
|
6,356 |
6,356 |
| C = |
6,3562 |
= 1,0056. |
|
6,3562 - 1,068 x 2,1792 x 0,0444 |
K' = 0,0056 x 0,625 = 0,0035 .
A meze spolehlivosti jsou podle vzorce 3.3.5.1-4 rovny:
pro vakcínu T 0,955 ± √0,0056 x 1,913 + 0,0035 x (-1,913) = 0,955 ± 0,063
a pro vakcínu U 0,649 ± √0,0056 x 1,423 + 0,0035 x (-1,301) = 0,649 ± 0,058.
Množství HA na ml se může odhadnout vynásobením relativní účinnosti a jejích mezí spolehlivosti předpokládaným obsahem 30 µg/ml. Výsledky jsou v tabulce 5.2.2-III.
Tab. 5.2.2-III Odhad obsahu HA (µg/ml)
|
|
Dolní mez |
Odhad |
Horní mez |
|
vakcína T vakcína U |
13,4 8,9 |
14,3 9,7 |
15,3 10,6 |