Vaccinum brucellosis (Brucella melitensis stirpe rev. 1) vivum cryodesiccatum ad usum veterinarium

Živá vakcína proti brucelóze (Brucella melitensis kmen Rev. 1) lyofilizovaná, pro veterinární použití

Je to lyofilizovaná suspenze živého kmene Brucella melitensis Rev. 1; v jedné dávce obsahuje 0,5 . 109 až 4 . 109 živých bakterií.

Výroba

Viz Vaccina ad usum veterinarium. Brucella melitensis kmen Rev. 1 se kultivuje ve vhodné živné půdě. Metoda kultivace je taková, aby se předešlo bakteriální disociaci, a tak se udržela hladká (S) fáze kultury. Bakterie se suspendují v tlumivém roztoku, který může obsahovat vhodné stabilizátory. Suspenze se plní do obalů a lyofilizuje se.

Výběr vakcinačního kmene

Pro přípravu vakcíny se smí použít jenom takový lapen, který je prokazatelně vyhovující z hlediska bezpečnosti a imunogenity. Účinnost se může prokázat následující zkouškou (5.2.7). Imunogenita. Z neočkovaného ovčího stáda prostého brucelózy se vybere 40 ovcí (samic), starých 4 až 5 měsíců. jako čelenžní lapen se použije 24hodinová kultura lapme Brucella melitensis H38 v tryptózovém agaru. Ke stanovení infekční dávky se provede předběžná zkouška, ve které s e použijí zvířata stejného plemene a věku, jako v hlavní zkoušce. Infekční dávka, která je mezi 10' až 10g jednotek tvořících kolonie, se vybírá tak, aby způsobila aborty u všech neočkovaných zvířat. Polovina zvířat se očkuje ve 4. až 6. měsíci věku v souladu s doporučeným programem a za použití minimální doporučené dávky. Synchronizuje se říje čtyřiceti zvířat, která se ve věku 10 až 12 měsíců inseminují. Dva až tři měsíce po inseminaci se zjišťuje březost a všechna zvířata, jež nej sou březí, se ze zkoušky vyloučí. Všem březím zvířatům se do spojivkového vaku nakape infekční dávka kmene Brucella melitensis H38. Výskyt abortů se zaznamená a jeho původ se ověří zkouškou na přítomnost použitého infekčního lapme u potratů a u bahnic (použijí se selektivní půdy podle Kuzdase a Morse nebo podle Farrella). Zkoušky na přítomnost použitého čelenžního kmene se u každého zvířete provedou v době porodu. Zkoušky na přítomnost použitého kmene v preskapulárních a retromamárních lymfatických uzlinách se provedou při porážce zvířat 4 až 6 týdnů p o bahnění. Zkoušku lze hoďnotit pouze v případě, jestliže se u nejméně 70 % nevakcinovaných zvířat:

• prokáží aborty vyvolané použitým infekčním kmenem,
• prokáže infekce jehňat použitým infekčním lanenem,
• prokáže infekce preskapulárních a retromamárních lymfatických uzlin po porážce.

Vakcína vyhovuje zkoušce, jestliže:

• nejvýše u 30 % očkovaných zvířat se zjistí aborty vyvolané použitým čelenžním lanenem,
• použitý čelenžní kmen se prokáže u jehňat nejvýše u 50 % očkovaných zvířat,
• použitý čelenžní kmen se prokáže v době porážky nejvýše u 40 % očkovaných zvířat.

Zkouška totožnosti

Brucella melitensis přítomná ve vakcíně se prokáže vhoďnými morfologickými, sérologickými a biochemickými zkouškami a kultivací. Kmen Rev. 1 je inhibován přidáním 3 µg sodné soli benzyl penicilinu k mililitru vhodné živné půdy; lapen roste na agaru obsahujícím v mililitru 2,5 µg streptomycinu.

Zkoušky na čistotu

Bezpečnost. Dvěma ovcím stáří 4 až 6 měsíců se doporučeným způsobem vstříkne po jedné dávce vakcíny. Zvířata se pozorují 21 dní a nezjistí se žádné významné místní nebo celkové reakce.

Určení disociační fáze. Vhodnou technikou se prověří nejméně 200 kolonií. Vakcinační kmen při kultivaci roste v hladké (S) fázi. Nejméně 95 % kolonií je hladkého typu.

Cizí mikroorganismy. Vakcína rozpuštěná předepsaným způsobem neobsahuje cizí mikroorganismy. Nepřítomnost jiných mikroorganismů než kmen Brucella melitensis Rev. 1 se ověří tak, jak je popsáno ve zkoušce na sterilitu, uvedené v článlaz Vaccina ad usum veterinarium.

Živé bakterie. Na pevné půdě vhodné pro lazltivaci kmene Brucella melitensis Rev. 1 se provede stanovení počtu živých bakterií. Vakcína obsahuje 0,5 . 109 až 4 .109 živých bakterií v jedné dávce.

Doba 50% perzistence. Každé z třiceti dvou myší kmene CD 1 samičího pohlaví ve vělaz 5 až 6 týdnů se subkutánně vstříkrne suspenze vakcíny obsahující 10 s živých bakterií. Vytvoří se náhodné skupiny po osmi zvířatech a v údobích 3,6, 9 a 12 týďnů se vždy jedna skupina utratí. Vyjmou se sleziny a individuálně se asepticky homogenizují v deseti objemových dílech tlumivého roztoku fosforečnanového s chloridem sodným o pH 6,8. Tato suspenze se naočkuj e po 0,4 ml na misky obsahující vhodnou živnou půdu. Na jednu slezinu se použijí nejméně 3 misky (dolní hranice detekce je pět bakterií na slezinu). Současně se provede stejná zkouška s referenčním lanenem, kterým je Brucella melitensis Rev. 1 BRP. Pomocí Bonet-Mauryho probitového transformačního postupu (osm myší ve skupině, celkový počet, násleďná grafická analýza na semilogaritmickém papíru s aritmetickou časovou stupnicí) se vypočítá doba 50% perzistence. Doba 50% perzistence pro vakcinační kmen se významně neliší od doby 50% perzistence referenčního kmene. Pro kmen Rev. 1 bývá obvykle doba 50% perzistence (7,9 f 1,2) týďne při intervalu spolehlivosti (P= 0,05).

Uchovávání

Při teplotě 2 °C až 8 °C.

Označování

Viz článek Vaccina ad usum veterinarium Na štítku obalu se uvede:

• množství bakterií Brucella melitensis kmen Rev. 1 v jedné dávce,
• že vakcína je určena pro ovce a kozy staré 4 až 6 měsíců,
• že vakcína může být pro člověka nebezpečná,
• že vakcína se nepodává zvířatům v období březosti a laktace,
• že vakcína může být nebezpečná pro hovězí dobytek, a že proto nemá být chován ve styku s očkovanými zvířaty.